產(chǎn)品說(shuō)明

　　本產(chǎn)品適用于豬肺炎支原體抗原生產(chǎn)，增菌效果好，亦可應(yīng)用于菌種復(fù)蘇活化和CCU檢測(cè)。

　　本產(chǎn)品血清用量少，利于抗原純化，有助于減少疫苗的動(dòng)物副反應(yīng)。

　　配制方法

　　1.量取80%終體積的常溫純化水于攪拌容器。

　　2.開啟攪拌，將培養(yǎng)基粉未緩慢加入配制容器，攪拌30分鐘至粉末完全溶解定容。

　　3使用NaOH溶液將pH值調(diào)至7.8。

　　4.先使用0.45 u m孔徑濾芯粗濾，再使用0.22u m孔徑濾芯正壓過(guò)濾，過(guò)濾后2°C-8C避光保存。

　　5.不同濾膜材質(zhì)對(duì)培養(yǎng)基組分的截留情況不同，推薦使用PVDF材質(zhì)。

　　菌種復(fù)蘇、活化

　　1.菌種更換新的培養(yǎng)體系需要適應(yīng)過(guò)程。為保證增菌效果，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)使用支原體培養(yǎng)基Z1對(duì)菌種進(jìn)行兩次以上活化傳代。使用支原體培養(yǎng)基Z1進(jìn)行CCU50檢測(cè)。

　　2.培養(yǎng)容器:優(yōu)選透氣瓶、裝液體積應(yīng)不超過(guò)總體積的20%。

　　3.復(fù)蘇:將菌種按照10%體積比接種于含10%-20%豬血清的支原體培養(yǎng)基Z1中;于37°C，60rpm振蕩培養(yǎng)至pH下降到7.0-6.8。

　　4.活化:將復(fù)蘇后的菌液按照10%體積比接種于含10%-20%豬血清的支原體培養(yǎng)基Z1中;于37°C，60rpm振蕩培養(yǎng)至pH下降到7.0-6.8，作為種子液。

　　CCU50檢測(cè)

　　1.稀釋液:含10%-20%豬血清的支原體培養(yǎng)基Z1。

　　2.稀釋和培養(yǎng):取數(shù)支已滅菌的2mLEP管，分別加入0.9mL稀釋液備用，取2.100uL菌液加入含0.9mL稀釋液的EP管中，于渦旋混合器上震蕩混勻，依次進(jìn)行10倍稀釋，在稀釋到10-7~10-10稀釋梯度時(shí)每個(gè)梯度做5個(gè)重復(fù)。另取空白培養(yǎng)基作為對(duì)照。將稀釋好的各管按順序排列并做好標(biāo)記，用透明膠帶固定。37°C靜置培養(yǎng)14天。

　　3.CCU50計(jì)算:距離比例=(高于50%的累計(jì)變色百分比一50%)(高于50%的累計(jì)變色百分比一低于50%的累計(jì)變色百分比)logCCU50=距離比例X稀釋倍數(shù)的對(duì)數(shù)+變色占比>50%對(duì)應(yīng)的稀釋度:

　　logCCU50=距離比例×稀釋倍數(shù)的對(duì)數(shù)+變色占比≥50%對(duì)應(yīng)的稀釋度；

表 1CCU50檢測(cè)結(jié)果實(shí)例

Table1ExampleofCCU50testresults

　　4.與傳統(tǒng)的CCU檢測(cè)方法比較，CCU50檢測(cè)方法分辨率更高，結(jié)果更加精確。

　　注意事項(xiàng)

　　1.為了保證增菌效果，請(qǐng)根據(jù)原有使用習(xí)慣添加血清、輔酶等添加物.

　　2.不同菌種來(lái)源，在相同培養(yǎng)基上也會(huì)表現(xiàn)出不同的生長(zhǎng)速度，使用本產(chǎn)品時(shí)培養(yǎng)時(shí)間可能與原培養(yǎng)時(shí)間有所差異，更快或更慢都是正常表現(xiàn)。

　　3.首次試驗(yàn)建議取pH7.0、pH6.9、pH6.8進(jìn)行CCU50測(cè)定，以得到最適的收獲時(shí)間點(diǎn)。

　　培養(yǎng)效果